레포트 단백질 정량 예비레포트

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본문 단백질 정량법 1. 실험의 목적 생명체를 구성하는 중요 분자인 단백질을 분자내의 에너지와 빛에너지 사이의 상호작용을 이용해 정량분석을 한다. 2. 서론 단백질이 당질이나 지질과 다른 점은 탄소, 수소 그리고 산소 이외에도 반드시 질소를 함유하고 있는 특징을 가지고 있는 물질들을 말한다. 또한 단백질이란 동식물체의 가장 중요한 구성 성분들의 하나인 동시에 동식물들이 생체로서의 기능을 수행하는데 있어서도 여러 가지 중요한 역할을 맡고 있는 물질들의 주요 구성 성분들로서, 화학적으로 수많은 여러 종류의 아미노산들이 펩타이드 결합을 통해서 결합된 고분자 화합물들이라고 할 수 있다. 다시 말해, 자연계에는 매우 다양한 단백질들이 존재하고 있으며 그들의 화학적, 물리적 성질들은 서로 다른 경우가 많아 정제 및 정량을 하는데 공통으로 사용 할 수 있는 한 가지 방법이란 없다. 따라서 단백질을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 시료에 함유되어 있는 다른 성분들의 특성, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라 적당한 방법을 선택하여 사용하여야 한다. 이와 같은 단백질을 용액 내에서 정량하는 방법은 Ninhydrine법, Kjeldahl법, Biuret법, 자외선 분광광도법, Bradford법, Lowry법 등이 있다. 실험실에서 흔히 쓰이는 단백질 정량방법으로는 Lowry 정량방법과 Bradford 정량방법이 흔히 쓰인다. 그 중 Lowry 정량방법은 Bradford 방법에 비해서 시간이 오래 걸리고 또 단백질 종류에 따라서 color의 변화가 심하므로 오늘날엔 Bradford 정량방법을 주로 이용한다. 가. Lowry 방법 BCA assay라고도 하는데, Bicinchoninic acid에서 나온 말이다. 단백질 정량에 있어서 Lowry법은 감도(10~200 ㎍)가 비교적 넓게 적용되기 때문에 오랫동안 광범위하게 이용되고 있는 방법이다. 이 방법은 알카리성 용액에서 단백질의 펩티드 결합과 구리가 반응하여 Cu+2 이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. 두 개 이상의 펩티드 결합이 근접해 존재하고 있을 때 강알칼리성 상태에서 2가의 구리이온(Cu+2)과 착염을 형성하여 발색한다. 또한 아미노산 중 트립토판(tryptophan)과 티로신(tyrosine)은 Folin 시약(phosphomolybdic phosphotungstic acid)을 환원시켜 청색으로 발색하는 반응을 하는데, 이를 이용하여 단백질 및 펩티드를 정량화한다. 정량을 위해서는 농도를 알고 있는 단백질 표준 용액(보통 bovine serum albumin, BSA)을 농도별로 만들어 시료와 동일한 조건에서 발색시키고, 발색의 강도는 단백질의 농도에 비례하므로 시료의 발색 정도와 단백질 표준 용액의 발색 정도를 비교하여 시료에 들어 있는 단백질의 양을 결정한다. 나. 분광광도기 특정 파장의 빛이 화학물질에 의해 흡수되는 정도를 측정하는 측정기를 분광광도기(spectrophotometer)라 한다. 보통 용액 상태의 시료를 빛을 잘 통과시키는 cuvette에 넣고 단일 파장의 빛을 비추어 빛이 시료에 의해 흡수되는 정도를 측정한다. 특정파장의 빛이 시료에 흡수되는 정도를 흡광도(absorbance, A 또는 OD)로 나타내고 흡광도와 빛을 흡수하는 시료와의 관계는 다음과 같이 주어진다. 하고 싶은 말 좀 더 업그레이드하여 자료를 보완하여, 과제물을 꼼꼼하게 정성을 들어 작성했습니다. 위 자료 요약정리 잘되어 있으니 잘 참고하시어 학업에 나날이 발전이 있기를 기원합니다 ^^ 구입자 분의 앞날에 항상 무궁한 발전과 행복과 행운이 깃들기를 홧팅 키워드 단백질, 방법, 정량방법, 시료, 용액, 발색