레포트 유전자 재조합 대장균 선별 예비

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[레포트] 유전자 재조합 대장균 선별 예비.hwp

본문 실험제목: 유전자 조작실험 3, 재조합 대장균의 선별 실험목적: 특정 유전자가 삽입되어 있는 plasmid DNA를 숙주세포인 competent cell (E. coli XL1-blue)에 도입시키고 재조합 되어진 DNA를 보유하고 있는 숙주세포를 선별하는 방법을 배운다. transformation시 사용되어지는 방법은 calcium chloride and heat shock method이다. 실험원리 1. calcium chloride and heat shock method 란? - 각종 염을 통하여 세포벽을 느슨하게 만든 뒤 온도차를 통하여 plasmid DNA를 competent cell에 transformation 시키는 방법으로 여러 가지 염들이 있지만 50mM CaCl₂용액이 전통적으로 사용되며 RbCl₂용액도 효과적이다. CaCl₂염이 들어있는 용액에 competent cell을 넣은 뒤 얼음에 약 30분정도 넣어두면 plasmid DNA가 세포벽에 다가가게 되는데, 그 상태에서 42℃정도의 water bath에 넣어 heat shock을 가하게되면 Ca 성분이 세포벽을 느슨하게 하는데 도움을 주면서 plasmid DNA가 competent cell 안으로 들어가게 된다. 그 다음 다시 얼음에서 약 30분 정도 두게 되면 세포벽이 다시 닫히며 안정된 상태가 된다. 이 과정을 calcium chloride and heat shock method라고 하게 된다. 이 방법은 간단하지만 효율이 낮아 이를 확인하는 과정이 필요한데 Blue-White screen 방법과 항생제를 이용한 방법이 많이 쓰인다. * competent cell : 대장균을 포함해서 대부분의 박테리아는 일반적인 조건에서 제한된 양의 DNA만을 도입하는데 이러한 종을 효과적으로 형질전환하기 위하여 DNA 도입능력을 강화하는 물리적이거나 화학적인 처리를 거쳐야만 하는데 이러한 처리를 받은 세포를 competent cell 이라한다. 실험원리 2. pBlueScript SK (+/-)에 있는 lac Z gene이 무엇이며, 어떠한 역할을 하는지 조사. - Operon 오페론(Operon)은 조절유전자(regulatory gene), 작동유전자(Operator), 프로모터(Promoter), 구조유전자(structural gene)들을 포함한 효소합성에 관여하는 일련의 DNA로 구성되어 있다. 이는 미생물 유전에서 발견된 것으로 연관된 유전자들을 하나의 전사단위로 묶음으로써 연관된 유전자들을 통일적으로 조절한다. 조절유전자란 독자적인 프로모터를 가지고 있으며 억제자(repressor)를 암호화하며 항상 발현된다. 두 번째로 작동유전자란 프로모터 내 혹은 프로모터와 구조유전자의 사이에 위치하여 RNA중합효소가 유전자에 접근하는 것을 조절한다. 구조 유전자는 효소의 유전정보를 암호화하고 있는 유전자이다. 대표적인 Operon으로는 lac operon, trp operon 이 있다. - Lac operon (lactose operon) Lac operon은 lactose 대사에 관여하는 3개의 효소 Lac Z , Lac Y , Lac A 를 암호화하고 있는 유전자군이다. 1) lactose 란? 하고 싶은 말 좀 더 업그레이드하여 자료를 보완하여, 과제물을 꼼꼼하게 정성을 들어 작성했습니다. 위 자료 요약정리 잘되어 있으니 잘 참고하시어 학업에 나날이 발전이 있기를 기원합니다 ^^ 구입자 분의 앞날에 항상 무궁한 발전과 행복과 행운이 깃들기를 홧팅 키워드 실험, 방법, 세포벽, 프로모터, 모터, 프로