실험레포트 미생물 플라스미드 실험

실험레포트 미생물 플라스미드 실험

[실험레포트] 미생물 플라스미드 실험.hwp

본문 1. 실험제목 : Mini-Preps of plasmid DNA 2. 실험날짜 : 2010.05.07.금~2010.05.14.금 3. 실험 조, 조원 : 4조, 김현수, 김혜인, 백종호, 송다영, 윤지원, 주현우 4. 실험목표 : Mini prep의 원리를 이용하여 Plasmid DNA를 분리해낼 수 있다. 5. 실험이론 및 원리 E.Coli세포에서 Plasmid DNA 와 Chromosome DNA를 분리하여 Plasmid DNA를 추출하는 원리. 단도직입적으로 말해서, Chromosome DNA와 Plasmid DNA의 구조적 차이라 할 수 있다.실험 과정에서, Solution Ⅰ, Ⅱ로 인해 플라스미드와 chromosome DNA가 세포내에서 외부로 방출된다. 이 때 NaOH는 DNA를 single strand로 denature시킨다. denature 과정에서, Chromosome DNA는 쉽게 single strand로 풀어지는 반면, plasmid DNA는 supercoil형태이기 때문에, alkaline condition에 대한 저항성이 있어서 쉽게 풀어지지 않는다. 따라서, plasmid DNA가 alkaline condition에 저항하여 intact form으로 solution 상에 녹아있는 반면에, Chromosome DNA는 denature되어 single strand로 풀린다. 그 후 Neutralization buffer를 첨가해 중성 환경으로 복원시키면 linearized 된 chromosome DNA는 다시 dsDNA로 돌아가기 힘들게 되고 (너무 길게 엉겨있어서 제 짝을 찾기가 만만치 않다. 쉽게 말해 부피가 커서 복원이 힘들다.) single strand DNA는 potassium acetate를 넣는 순간 불용해성을 띄고 침전되어버린다. 따라서 plasmid DNA만 추출이 가능하다. 주의할 점은, supercoil이 alkaline condition 에 대한 저항성을 가지나, 지속적으로 노출되었을 경우, supercoil DNA 역시 denature 된다는 점이다. plasmid 정제 프로토콜에 보면, solution 2를 넣고 5분이상 incubation하지 말라는 주의가 항상 있는데, 이는 plasmid DNA가 alkaline condition에 오래 노출되면 supercoil 또한 denature되기 때문이다. 여기 쌤이 보여준 그림 넣을까 싶은데ㅠㅠ못찾겟으면 내 그린거 있으니까 그려 넣을려궁 6. 실험시약 및 기구 하고 싶은 말 좀 더 업그레이드하여 자료를 보완하여, 과제물을 꼼꼼하게 정성을 들어 작성했습니다. 위 자료 요약정리 잘되어 있으니 잘 참고하시어 학업에 나날이 발전이 있기를 기원합니다 ^^ 구입자 분의 앞날에 항상 무궁한 발전과 행복과 행운이 깃들기를 홧팅 키워드 실험, 원리, 저항성, 분리, 금, 이상